ABT-737 ve RAD-001(Everolimus) İlaç Kombinasyonunun Böbrek Kanseri Üzerinde Kemoteropatik Özelliğinin RenCA Hücre Modeli ile Balb-C Fareleri Üzerinde İncelenmesi

Abstract

Böbrek hücreli karsinoma (BHK) yetişkinlerdeki malignant tümörlerin %2-3?ünü oluşturmaktadır. BHK tümörlerinin %90?nında von Hippel?Lindau (VHL) tümör baskılayıcı geninde mutasyon bulunması bu tümörlerin hipoksik ortam koşullarını taklit ederek yoğun damarlaşma, hızlı büyüme ve yüksek invasiv potansiyel göstermesine sebebiyet vermektedir. VHL fonksiyon bozukluğu sonrası HIF-? transkripsiyon faktörlerinin aktive olarak PI3K (fosfotidilinositol-3-kinaz)-AKT-mTOR (memelilerin rapamisin hedefi) yolağı sağkalım mekanizmasını harekete geçirdiği ve hücre transformasyonunu sağlayan mutasyon birikmesine sebebiyet verdiği bildirilmiştir. Metastatik BHK tedavisinde kullanılan ilaçlar bu kinaz yolağını durdurarak hücre büyüme/sağkalımını inhibe etmeye yöneliktir. BHK tedavisinde mTOR serin/treonin kinazının baskılanması hedef alınarak Temsirolimus, Everolimus ve Deferolimus gibi rapamisin analoglarının kullanımı yoluna gidilmiştir. Ancak bu ilaçlarla yapılan kemoterapötik tedaviler ileri evre yada metastatik BHK sahip hastaların ömürlerini sadece uzatabilmekte hastalığı tedavi ederek ölüm oranını azaltamamaktadır. Proje kapsamında BHK?da gelişen Everolimus direncinin Bcl-2 sağkalım yolağının aktif olarak sağlandığı hipotezimizi kurulmuş ve BHK tedavisinde Everolimus ile ABT-737 Bcl-2 inhibitörü kombinasyonunun daha etkili olabileceği öne sürülmüştür. Deney düzeneğimizde Bcl-2 ifadesi gösteren ve Everolimus direncine sahip primer A498 ve metastatik Caki-1 BHK hatları ile Everolimus?a dirençli hale getirilmiş fare BHK hattı erRenCa kullanılmıştır. WST-1, Western Emdirimi ve Annexin V deney sonuçlarımız, A498, Caki-1 ve erRenca BHK hatlarında Everolimus ile ABT-737 kombinasyonunun 24 saat içerisinde mTOR yolağını durdurarak hücre büyümesine ket vurduğunu, hücre siklusunu G1 fazında tutarak hücre bölünmesini engellediğini gösterirken ilerleyen saat inkübasyonlarında bu hücrelerde apoptotik yolağın Kaspaz 9 ve 3?ün aktive ederek apoptotik hücre ölümünün tetiklendiği gösterilmiştir. erRenca hücreleri kullanılarak oluşturulan xenograf kanser modelinde monoterapilerin tümör gelişimini baskılamada 100?de 100 başarı göstermezken Everolimus-ABT-737 ilaç kombinasyonunun in-vivo tümör gelişimini tamamıyla engellediği ortaya konmuştur. Literatürde FK506 protein aile üyesi FKBP38 proteininin Bcl-2 ve Bcl-XL proteinlerine bağlanarak aktivasyonunda rol aldığı gösterilmiştir. Everolimus-ABT-737 ilaç kombinasyonu etkinliğinin moleküler mekanizmasını açığa kavuşturmak için yaptığımız eş-immün çökeltme (co-IP), WST-1 ve Western Emdirimi deneyleri Everolimus direncinde FKBP38 proteininin rol oynadığını ileri sürmüştür.